商品描述：
| 產(chǎn)品名稱 | DMEM 培養(yǎng)基 | 規(guī)格 | 500ml |
| 用途 | 僅供科研研究實驗 | 貨號 | EY-XP4246 |
DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基，是在MEM培養(yǎng)基的基礎上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量，同時又分為高糖型（4500mg/L）和低糖型(1000mg/L)。
DMEM是 dulbecco's modified eagle medium的縮寫，所以其特點主要包括以下：
（1）氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍，且含有非必需氨基酸等；
（2）維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍；
（3）含有糖酵解途徑中的重要物質——丙酮酸；
（4）含有微量的鐵離子。
注意事項：
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
公司正在出售的產(chǎn)品：
| 結腸癌細胞HCT116的耐藥株 | 293T人胚腎細胞 |
| L1210/DDP小鼠白血病耐藥株 | 769-P人腎細胞腺癌細胞 |
| L1210/DDP小鼠淋巴細胞白血病細胞耐細胞株 | 786-O 人腎透明細胞腺癌細胞 |
| L1210/Taxol小鼠白血病耐藥株 | 95-D人高轉移肺癌細胞 |
| HCT116/L-OHP人結腸癌耐細胞株 | A-431[A431]人皮膚鱗癌細胞 |
| MCF-7/ADR人乳腺癌耐藥細胞株 | A875人黑色素瘤細胞 |
| BIU-87/DDP人膀胱癌耐藥株 | ACC-2人涎腺腺樣囊性癌細胞 |
| Huh-7/DDP人肝癌耐藥株 | ACC-M人涎腺癌細胞 |
| HCT8/DDP人結腸癌耐藥株 | BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞 |
| SMMC-7721/DDP人肝癌耐藥株 | BxPC-3人原位胰腺腺癌細胞 |
| A2780/DDP人卵巢癌耐藥株 | C33A人子宮頸癌細胞 |
| HO-8910/DDP人卵巢耐藥株 | Caki-2人腎透明細胞癌細胞 |
| K562/DDP人白血病耐藥株 | CAL-27人舌鱗癌細胞 |
| MCF7/DDP人乳腺癌耐藥株 | Caov-3人卵巢癌細胞 |
| A549/FU人肺癌氟耐藥株 | CaSki人宮頸癌上皮細胞 |
| SGC7901/FU人胃癌氟耐藥株 | CCC-HPF-1人胚肺成纖維細胞 |
| PATU-8988/FU人胰腺癌氟耐藥株 | CNE-2Z人鼻咽癌細胞 |
| SMMC7721/FU人肝癌氟耐藥株 | COLO 201人結直腸腺癌細胞 |
| HCT8/FU人結腸癌氟耐藥株 | DAMI人巨核細胞白血病細胞 |
| ovo/FU人結腸癌氟耐藥株 | DMEM 培養(yǎng)基DLD-1人結直腸腺癌上皮細胞 |
| A549/L人肺癌耐細胞株 | EA.hy926人臍靜脈細胞融合細胞 |
| SMMC7721/L人肝癌耐藥株 | ES-2人卵巢透明細胞癌細胞 |
| BEL/L人肝癌耐細胞株 | FaDu人咽鱗癌細胞 |
| lovo/L人結腸癌耐細胞株 | GBC-SD人膽囊癌細胞 |
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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